الأشعة فوق البنفسجية للكشف عن ( عالية الأداء المزدوج شعاع مزدوجة الطول الموجي ) مع المدمج في معالجة البيانات

نطاق الطول الموجي : 254nm 280nm , و بين 254nm و 280nm-400nm . . . . . . .

* خصائص DWD-1 الصك

تحديد البروتين 280nm / 254nm الطول الموجي المزدوج :

البروتين يحتوي على الأحماض الأمينية العطرية مثل التيروزين ، تريبتوفان ، على السندات المزدوجة . لديهم خصائص امتصاص الأشعة فوق البنفسجية ، ذروة امتصاص في 280nm الطول الموجي ، و كثافة الضوء من ذروة امتصاص في هذا الطول الموجي تتناسب طرديا مع التركيز ، وبالتالي يمكن أن تستخدم كأساس لتحديد نوعية وكمية من البروتين . ومع ذلك ، لأن محتوى التيروزين التربتوفان من البروتينات المختلفة هي مختلفة ، من أجل تحديد بدقة ، نقية من البروتينات التي تحتاج إلى اختبار يجب أن تؤخذ كمعيار للمقارنة ، أو معامل الخمود معروفة كمرجع . وبالإضافة إلى ذلك ، العديد من المواد غير البروتين في 280nm الطول الموجي - ثابت القدرة الاستيعابية ، قد تتداخل . وخاصة الأحماض النووية ( البيورين بيريميدين قواعد ) هي أكثر خطورة . امتصاص الحمض النووي هو 10 مرات أقوى من البروتين في 280nm ( غرام ) ، ولكن امتصاص الحمض النووي هو أقوى في 254nm ، ذروة امتصاص حوالي 254nm . . . . . . . معامل الخمود في 254nm هو ضعف ذلك في 280nm . . . . . . .

البروتين ، على العكس من ذلك ، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية قيمة 280nm أكثر من 254nm . . . . . . .

عادةس

نسبة امتصاص الضوء من البروتين النقي : a280 / a254

نسبة امتصاص الضوء من الحمض النووي النقي : a280 / a254 " 0.5 "

ولذلك ، عندما الأحماض النووية موجودة في وقت واحد في حل البروتين ( حتى في معظم النظم البيولوجية ) ، od254nm و od280nm يجب تحديدها في وقت واحد . ثم ، على أساس نسبة امتصاص اثنين من أطوال موجية ، المحتوى الحقيقي من البروتين يمكن حسابها من خلال صيغة تجريبية للقضاء على تأثير الأحماض النووية .

تركيز البروتين = 1.45 × a280-0.74 × a254 ( ملغ / مل )

هذه الصيغة التجريبية تستند على مجموعة من البيانات التي تم الحصول عليها من خليط من البروتينات المعروفة ( الخميرة enolase ) و ( الخميرة الحمض النووي الحمض النووي ) مع تركيزات مختلفة .